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細(xì)菌基因組重測序

技術(shù)簡介

細(xì)菌基因組重測序是對已有參考基因組信息的細(xì)菌進(jìn)行基因組水平的再測序,并對個體或者群體樣品進(jìn)行生物信息學(xué)分析,能夠分析近源菌種之間的單核苷酸多態(tài)性 (SNPs) 、插入 (Insertion) 、缺失 (Deletion) 、拷貝數(shù)變異  (CNV)等基因組水平變異類型,為篩選菌株的優(yōu)良性狀,菌株抗藥性等研究提供指導(dǎo)與依據(jù)。

技術(shù)路線

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送樣建議

濃度 (Qubit)體積總量基因組完整性
≥50 ng/μL≥30 μL≥20 μgDNA 無降解

技術(shù)參數(shù)

細(xì)菌重測序測序策略數(shù)據(jù)量周期

300bp 小片段文庫HiSeq/NovaSeq PE150

100X45個自然日

案例分析

細(xì)菌全基因組重測序闡述引起大腸桿菌自發(fā)突變的因制[1]

研究背景                

完全了解一個進(jìn)化過程需要自發(fā)突變率,光譜識別以及物種特征三個因素。根據(jù)累積突變可以計算出每一代基因組的突變率。

研究目的

通過全基因組重測序技術(shù)研究進(jìn)化過程中自發(fā)突變效應(yīng)影響。

研究結(jié)果

在三株大不相同的不同僅僅達(dá)到 50%,這也就說明了每一代基因組中的突變率是 1–2×10?3 。四個因素決定了自發(fā)突變的發(fā)生:自身 DNA 聚合酶缺陷,內(nèi)源性誘導(dǎo) DNA 損傷,外源性藥物誘導(dǎo) DNA 損傷,易錯聚合酶激活

t19.png

圖1. DNA修復(fù)缺陷的大腸桿菌堿基替換率

參考文獻(xiàn)

[1]Foster, P. L., Lee, H., Popodi, E., Townes, J. P. & Tang, H. Determinants of spontaneous mutation in the bacterium Escherichia coli as revealed by whole-genome sequencing. Proc Natl Acad Sci U S A 112, E5990-5999, doi:10.1073/pnas.1512136112 (2015).

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